对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离纯粹完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的，如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。

RNA应用

提取RNA并且能保证高质量是非常困难的。由于RNA为单链结构，相较于DNA稳定的双链结构，更容易被水解，自身结构十分不稳定，并且在RNA的相关实验中，内源性和外源性的RNA酶也会导致RNA的降解。了解组织RNA提取技术，可以方便我们更好提取多样本组织RNA。

一、样品采集

RNA酶（Rnase）是导致RNA降解最主要的物质。此酶非常稳定，在一些极端的条件下只可暂时失活，但限制因素去除后又迅速恢复活性。样本在离开活体或原来的生长环境后内源酶就会开始降解RNA。

因此需要立即将样品投入液氮冷冻，或者后续长期在-80℃中保存。当样本不能立即冻存时，可以使用RNA保护液，在多种储存条件下长期稳定和保护样本中的RNA。

传统上，只有两个办法可以彻底抑制内源酶活性：

1、立即加入裂解液并且彻底而迅速地匀浆；

2、切成小块后立即投入液氮冷冻。后者适合所有的样品，而前者只适合细胞及内源酶含量较低的并且较容易匀浆的组织。这两种方法都要求快速操作。

二、组织RNA提取

（1）试剂耗材

试剂耗材要求只有一个，无酶！！！

操作时候戴口罩、戴手套。一方面是保护自己，另一方面可以防止皮肤飞沫的外源性酶引入！

（2）提取过程

裂解——结合——漂洗——DNA消化——漂洗——洗脱

磁珠法核酸提取流程

裂解

提取时组织要充分研磨，组织量不宜过少，更不宜过多。提取过程需要注意裂解液与样本的比例，加入裂解液后应给予充分的孵育时间，确保样本充分裂解，裂解不充分会导致RNA产量严重受损！

结合

加入磁珠和结合缓冲液（BindingBuffer），促进磁珠与核酸特异性结合，进而分离核酸与蛋白质。

洗涤及DNA消化

在分离的核酸中加入DNase，消化DNA，得到纯净的RNA。

洗脱

RNA的洗脱、溶解用水必须是无酶水！此外需要根据样本特性与数量预估RNA产量加入合适的体积的水进行洗脱、溶解保证RNA的浓度。

三、RNA的保存

提取的RNA应当于-80℃进行保存，根据实际需要进行合理分装，避免反复冻融！！！

如果后续需要转化成cDNA进行实验，则可将提取的RNA直接反转录合成cDNA后再进行保存，cDNA可保存于-20℃。

四、常见问题分析

1.为什么提取的RNA有降解？

（1）使用的组织材料不新鲜。提取RNA应采用新鲜的组织材料，或将新鲜组织材料用液氮迅冻后置于-80℃保存。

（2）提取RNA时使用的试剂及耗材中混有RNase。

（3）提取的组织材料中含有大量内源RNase。

2.如何防止提取RNA过程中RNA的降解？

（1）实验过程中使用的玻璃器皿使用前可于180℃干烤8h以上，塑料制品要用氯仿冲洗。焦磷酸二乙酯（DEPC）是RNase的强烈抑制剂，RNA提取过程和逆转录过程中所用的水用DEPC处理。

（2）实验人员的手为RNase的重要污染源，进行RNA实验时应始终戴手套，并应勤换手套。

（3）提取的样品材料应尽可能新鲜，如果不能及时提取RNA，取样后应保存于液氮中。

五、凡知医学—组织RNA提取试剂盒

组织RNA提取试剂盒（磁珠法）

本产品基于超顺磁性的磁性粒子纯化技术，可轻松除去基因组DNA并高效吸附RNA，旨在给客户提供一种快速、简单、高质量的核酸提取方法。

产品优势适用广泛：可用于多种不同类型组织RNA的提取，包括新鲜组织、液氮冷冻保存组织、RNAlater等。纯度高效：获得的RNA可直接用于PCR、RT-PCR、二代测序、三代测序等下游实验。过程安全：提取过程不涉及有毒的酚、氯仿等有机溶剂。场景灵活：既可支持手动提取，又可高效地与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率。

案例展示

利用本试剂盒分别对新鲜小鼠肝（2份）、肾（2份）进行RNA提取，通过Nanodrop仪测定浓度。结果显示2种不同组织A260/A280比值均在1.9~2.2之间，A260/A230比值均大于2.0，总RNA的得率好、纯度高；琼脂糖凝胶电泳结果显示，5S、18S和28S三条条带均清晰明亮，RNA的完整性好。

返回搜狐，查看更多

责任编辑：

未经允许不得转载：头条资讯网_今日热点_娱乐才是你关心的新闻 » 了解组织RNA提取技术，轻松搞定多样本组织RNA提取难题！